染色不均？脫色總過度？革蘭氏染色痛點(diǎn)一次解決！

更新時(shí)間：2026-01-20 點(diǎn)擊次數(shù)：154

革蘭氏染色——這個(gè)由丹麥科學(xué)家漢斯·革蘭在1884年發(fā)明的技術(shù)，至今仍是微生物實(shí)驗(yàn)室的基石。依據(jù)細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的不同，通過簡單的紫色與紅色區(qū)分，它告訴我們眼前的細(xì)菌是革蘭氏陽性（G⁺）還是革蘭氏陰性（G^-），為細(xì)菌鑒定、感染診斷、抗生素選擇提供了最初步卻至關(guān)重要的依據(jù)。然而，正是這項(xiàng)看似基礎(chǔ)的技術(shù)，卻讓無數(shù)檢驗(yàn)人員又愛又“恨"。

標(biāo)準(zhǔn)五步法，步步是挑戰(zhàn)

第一步：涂片與熱固定

制備涂片：取一滴無菌水或生理鹽水于載玻片中央，用無菌接種環(huán)挑取少量菌落，均勻涂布成直徑約1厘米的薄層膜。
風(fēng)干：在空氣中自然風(fēng)干。
固定：將有菌膜的一面朝上，快速通過酒精燈火焰2-3次。

取菌、涂片、過火固定——聽起來簡單，但菌量多少算合適？火焰溫度多高算剛好？菌量不足影響鏡檢，過熱則導(dǎo)致細(xì)胞變形。全憑手上功夫，新手往往需要數(shù)月練習(xí)才能穩(wěn)定發(fā)揮。

第二步：結(jié)晶紫初染（1分鐘）

用結(jié)晶紫染液覆蓋菌膜，開始計(jì)時(shí)，染色1分鐘。
用緩流自來水輕輕沖洗，洗去多余染液，甩干玻片上多余水分。

染液是否均勻？是否沉淀？這些細(xì)節(jié)都直接影響最終效果。

第三步：碘液媒染（1分鐘）

用碘液覆蓋菌膜，染色1分鐘。
再次用細(xì)緩水流輕輕沖洗，甩干。

碘液與結(jié)晶紫形成復(fù)合物，這是染色成敗的關(guān)鍵化學(xué)反應(yīng)之一。

第四步：乙醇脫色（5-15秒）

將載玻片傾斜，用95%乙醇滴流沖洗涂片，直至流下的乙醇幾乎無色（此過程通常僅需5-15秒，具體時(shí)間需經(jīng)驗(yàn)判斷）。
立即用緩流水輕輕沖洗，脫色結(jié)束。

這是整個(gè)流程中變數(shù)最大的一步。脫色不足，G^-菌可能被誤判為G⁺；脫色過度，G⁺菌又會(huì)“變紅"成為假陰性。短短幾秒鐘的差異，可能導(dǎo)致相反的結(jié)論。

第五步：沙黃復(fù)染（30-60秒）

最后一步的復(fù)染為G^-菌“上色"，完成最終的色彩區(qū)分。

用沙黃染液覆蓋菌膜，復(fù)染30秒至1分鐘。
用細(xì)緩水流沖洗干凈，用吸水紙輕輕吸干或自然風(fēng)干，鏡檢觀察。

左：革蘭氏陰性菌（G^-）；右：革蘭氏陽性菌（G⁺）

常見問題解析：為什么你的結(jié)果可能不可靠？

脫色環(huán)節(jié)如何把握？為什么說“失之毫厘，謬以千里"？

脫色是革蘭氏染色中最關(guān)鍵也最難標(biāo)準(zhǔn)化的一步，全憑操作者經(jīng)驗(yàn)控制時(shí)間：

脫色不足：G^-菌本應(yīng)被脫去的結(jié)晶紫-碘復(fù)合物未被洗凈，復(fù)染后仍呈紫色，導(dǎo)致假陽性
脫色過度：G⁺菌的復(fù)合物也被溶出，最終被染成紅色，造成假陰性
解決方案：需密切觀察流下乙醇的顏色變化，新手建議用標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)照練習(xí)。

為什么會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不明確或顏色不典型？

菌齡過老：超過24-48小時(shí)的G⁺菌細(xì)胞壁可能降解，染色后呈紫紅混雜
涂片過厚：脫色劑無法滲入菌膜深層，造成內(nèi)部細(xì)菌脫色不勻
解決方案：使用18-24小時(shí)新鮮菌，制備薄而均勻的涂片。

染色后鏡檢，背景為什么有雜質(zhì)或沉淀？怎么辦？

多為染液沉淀或沖洗不當(dāng)所致。
解決方案：染液需過濾使用，每一步?jīng)_洗后應(yīng)將玻片充分瀝干。

熱固定時(shí)要注意什么？

固定不足：菌體在染色過程中被沖脫
過熱固定：細(xì)胞變形破裂，影響形態(tài)判斷
解決方案：玻片在火焰上快速通過2-3次，以不燙手背為宜。

為什么鏡檢時(shí)總找不到足夠細(xì)菌？

取菌量不足
涂片后沖洗水流過猛，沖走菌膜
解決方案：挑取適量菌苔，所有沖洗步驟使用緩流水。

傳統(tǒng)方法的三大困境

結(jié)果不一致：不同操作者、不同時(shí)間、不同狀態(tài)，都可能得到不同的染色結(jié)果。
效率低下：單張玻片完整流程需6-10分鐘，批量處理時(shí)更是耗時(shí)費(fèi)力。
質(zhì)量控制難：缺乏標(biāo)準(zhǔn)化流程，結(jié)果重復(fù)性難以保證。

破局：當(dāng)經(jīng)典技術(shù)遇上智能自動(dòng)化

針對(duì)這些長期存在的實(shí)驗(yàn)室痛點(diǎn)，我們推出了HD-GM100型全自動(dòng)革蘭氏染色儀——一款真正實(shí)現(xiàn)革蘭氏染色全流程自動(dòng)化的設(shè)備，將傳統(tǒng)依賴人工經(jīng)驗(yàn)的繁瑣步驟整合為智能化系統(tǒng)，可顯著提升染色質(zhì)量與操作效率。